【考试带的工具】多种工具带你走进糖蛋白的神秘世界
继基因组学和蛋白质组学之后，糖组学逐渐受到了人们的重视。糖组学关注的焦点是糖蛋白，糖蛋白上以共价键连接着各种聚糖，这些聚糖参与了细胞的许多关键活动（例如信号传导和细胞粘附），有着重要的生物学和医学意义。举例来说，抗体上的聚糖“影响着抗体的生物活性、药代动力学和稳定性，”Janssen制药公司的科学主管T. Shantha Raju说。生物通 www.ebiotrade.com
绝大部分糖蛋白可以分为两类，N-连接糖蛋白和O-连接糖蛋白。在N-连接糖蛋白中，糖链与蛋白的天冬酰胺残基（N-糖苷键）以共价键相连。而O-连接糖蛋白的糖链与蛋白部分的丝/苏氨酸残基相连（O-糖苷键）。
糖蛋白的聚糖成分非常多变，但其中的规则却鲜为人知。人们无法根据给定的糖基化位点，判断与之相连的聚糖种类。实际上，同一个糖基化位点在不同时间点可以连接不同结构的糖链。生物通 www.ebiotrade.com
与其他“组学”研究相比，糖组学研究特别复杂，这愈发凸显了研究工具的重要性。从电泳到串联质谱，现在糖蛋白的分析工具越来越精良，人们对这些复杂分子的理解也越来越深入。本文介绍了一些糖蛋白研究的常用工具和前沿技术，希望能帮你轻松走进糖蛋白的神秘世界。
糖组学工具生物通 www.ebiotrade.com
糖蛋白大多位于细胞表面，属于水溶性不好的膜蛋白。目前研究者们主要通过透析、超滤、电泳和层析等方法来分离纯化糖蛋白。
据Sigma-Aldrich公司的Robert Gates介绍，分析糖蛋白上的聚糖主要有两种途径：将糖链从蛋白骨架上释放出来，然后研究游离的聚糖；或者消化糖蛋白，生成糖肽以便进一步研究。生物通 www.ebiotrade.com
糖链释放主要有酶释放和化学释放两种方法。酶法释放比较简单，条件也很温和，还能够为人们提供大量的信息，因此很受欢迎。N－糖肽酶F(PNGase F)就是释放N－糖链常用的一种酶。然而，目前还没有合适的酶来释放O-糖链，人们只能采用化学释放法。（延伸阅读：Science聚焦神秘的多糖）
化学法主要是肼解法，这种方法对N－糖链和O－糖链均适用。但肼解法的反应条件比较剧烈，之后还需要复原处理，而且蛋白部分已经破坏，无法进行糖基化位点的相关研究。生物通 www.ebiotrade.com
N-聚糖制备一直是一个低通量的过程。不过，ProZyme公司开发的GlykoPrep™糖样品快速制备平台可以使通量大大提高。该产品使用安捷伦的AssayMAP™小柱，可以在三个小时以内消化和回收多至192个样本。“在此之前，人们完成这一流程需要三到四天，”ProZyme公司的Justin Hyche说。
